轉基因玉米品系98140PCR-熒光探針法【結果分析條件設定】:
u 基線(Baseline)設定:應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應比最早出現指數擴增的樣本Ct值減少1~3個循環,建議基線設為6~15。
u 閾值(Threshold)設定:將閾值線設定在剛好超過正常陰性質控品擴增曲線的最高點。
【質控標準】:
1. 陰性質控品的檢測結果應為陰性,無指數擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質控品的檢測結果應為陽性,有明顯的指數擴增期,Ct值應小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結果判斷】:
1. 陽性:有明顯的指數擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復核一次,若復核結果Ct<40且有指數擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【注意事項】:
1.PCR 操作各階段應嚴格分區操作,避免交叉污染。
2.試劑盒各組分使用前應充分融化混勻,離心數秒后使用。
3.各組分不得與其他產品或不同批號的相應成分進行互換。
4.待測標本若不及時檢測,應保存于-20℃或-70℃。
5.樣品的處理應該嚴格按照生物安全規范操作。
6.PCR 操作人員應具有經驗和受過專業培訓。
7.本試劑盒僅用于科研使用,不做為臨床診斷使用。
【儲存條件及有效期】
1.避光-20℃儲存,有效期 12 個月。
2.低溫運輸不能超過 4 天;開封后避光-20℃儲存,對有效期沒有影響。避免反復凍融,凍融 6 次不影響檢測效果。
3.生產日期、有效期至:見外包裝盒。
【適用儀器】
適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動熒光PCR 檢測儀。
【樣本要求】
1.樣本種類:鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液;培養物等樣品。
2.保存條件:采集的標本應及時送檢,24 小時內檢測的應 4℃保存,超過 24 小時的最好-70℃保存,并避免反復凍融。
【檢測方法】
1 . 試劑準備(試劑準備區)
將試劑盒各組分置 4℃避光融化,充分混勻后瞬間離心。計算試劑使用份數 N(N=樣本數+1 管陽性對照+1 管陰性對照),根據下表配置反應體系mix,加入一適當體積離心管中,充分混勻后瞬間離心,按 20μL 分裝至 PCR 反應管/板,并轉移至樣本處理區。


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