PBS緩沖液 返回列表頁

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：PBS緩沖液    

英文名稱：PBS

貨號：FS-02X0065

規(guī)格：500ml   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

 Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)基質(zhì)金屬蛋白8(MMP8)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Microsomal Glutathione S Transferase 2 (MGST2)微粒體谷胱甘S轉(zhuǎn)移2(MGST2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1)纖溶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Osteoprotegerin (OPG)骨保護(hù)(OPG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Osteoprotegerin (OPG)骨保護(hù)(OPG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Creatine Kinase, Muscle (CKM)肌肌激(CKM)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Creatine Kinase, Muscle (CKM)肌肌激(CKM)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

 Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
PBS緩沖液C1orf180/AIDA  1號染色體開放閱讀框80抗體規(guī)格: 0.2ml

APP/ABPP  APP/ABPP淀粉樣前體蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

APP695 (CT)  淀粉樣前體蛋白抗體（C端）規(guī)格: 0.1ml

EML4/C2orf180  限制過度增殖相關(guān)蛋白EML4抗體規(guī)格: 0.2ml

C2orf24  2號染色體開放閱讀框24抗體規(guī)格: 0.2ml

C2orf18/ANT2BP  2號染色體開放閱讀框18抗體規(guī)格: 0.2ml

APR3/C2orf28  凋亡相關(guān)蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

ECRG4/C2orf40  食道癌相關(guān)基因4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。